Per iniziare, preparare i topi anestetizzati per la procedura chirurgica. Usando le forbici chirurgiche, incidi la pelle lungo il centro dell'area rasata della testa per esporre il cranio. Quindi, pulisci il cranio con un batuffolo di cotone sterile utilizzando perossido di idrogeno diluito per uno o tre secondi e asciuga il cranio con un nuovo batuffolo di cotone sterile.
Per allineare il cranio anteriormente e posteriormente, misurare la profondità ventrale dorsale in bregma e lambda. Usando il bgma come punto di partenza, individua e segna l'area desiderata sulla corteccia. Quindi, usa una punta da trapano a trefina e un trapano dentale per esporre la corteccia.
Assicurarsi che l'angolo della punta del trapano sia perpendicolare alla curvatura del cranio per ottenere una craniotomia uniforme e prevenire danni. Forare fino a quando non si avverte una riduzione della resistenza, quindi interrompere il processo di perforazione. Utilizzando una punta dell'ago calibro 23, rimuovere con cautela il frammento osseo staccato.
Ora, pulisci la corteccia esposta con schiuma chirurgica imbevuta di ACSF freddo per rimuovere eventuali detriti e fermare l'emorragia. Fai un'incisione per facilitare l'inserimento del microprisma e alleviare la pressione nella corteccia. Fissare il coltello chirurgico al supporto sul braccio stereotassico e orientare la lama o il braccio stereotassico per tagliare lungo l'asse laterale mediale.
Ora, sposta il coltello sulla coordinata anteriore posteriore desiderata. Quindi, sposta il coltello sul bordo mediale della craniotomia e abbassalo lentamente fino a toccare l'osso. Usa l'equazione data per determinare la profondità dell'incisione pretagliata dalla superficie del cranio.
Assicurarsi che la lunghezza dell'incisione sia maggiore di un millimetro. Idealmente, dovrebbe essere di circa 1,2 millimetri. Spostare il coltello dal bordo mediale della craniotomia alla coordinata mediale iniziale dell'incisione e abbassare lentamente il coltello nella corteccia.
Dopo aver perforato la dura ed essere entrati nella corteccia, applicare una goccia di ACSF freddo per mantenere il tessuto lubrificato e idratato. Una volta raggiunta la profondità finale, spostare il coltello lungo l'asse laterale mediale. Se il fesso si trascina con il coltello, muovi il coltello su e giù alcune volte per assicurarti che il fazzoletto venga tagliato.
Quindi, continua a muoverti lateralmente mentre riporti il coltello alla sua profondità finale. Al termine, solleva lentamente il coltello. In caso di comparsa di sangue, pulire il sito dell'incisione con schiuma chirurgica imbevuta di ACSF per diluire e rimuovere il sangue.
Posizionare una schiuma satura sulla corteccia esposta fino al momento di inserire il microprisma. Fissare il microprisma al kit dell'impianto. Assicurarsi che il lato imaging del prisma sia opposto alla vite della piastra di base.
Fissare il microprisma alla cornice stereotassica e orientarlo in modo da allinearlo con l'incisione. Abbassare lentamente il microprisma nel sito di incisione. Rimuovere inizialmente l'ACSF, ma una volta che il prisma è nella corteccia, sciacquarlo con ACSF freddo.
Se necessario, aggiungere altro ACSF e agitare la corteccia muovendo il prisma su e giù. Coprire l'area corticale esposta e la lente con uno strato protettivo di adesivo siliconico che riduce al minimo l'eccesso di adesivo sul cranio circostante e sul cannocchiale fittizio. A questo punto, posizionare la placca della testa posteriormente per un corretto posizionamento dell'impianto nell'applicazione del cemento.
Allineare la linea mediana della placca della testa leggermente a destra della craniotomia proposta per assicurarsi che entrambi i lati possano essere fissati durante gli esperimenti di fissaggio della testa. Quindi, mescolare un misurino di polvere di cemento opaco con quattro gocce di mezzo di miscelazione e una goccia di catalizzatore per preparare il cemento dentale adesivo. Applicare del cemento sulla placca della testa e sul cranio e tenere la placca della testa in posizione fino a quando il cemento non si indurisce.
Applicare del cemento adesivo per coprire il cranio e il tessuto esposti, incorporando il microprisma e la placca di testa fino a quando non si stabilizzano. Spostare il braccio stereotassico verso l'alto stabilizzando il microprisma con una pinza per staccare il microscopio fittizio. Posizionare la copertura protettiva sull'obiettivo e fissarla serrando la vite.
I neuroni degli animali che esploravano un'arena aperta al buio hanno mostrato livelli comparabili di fluorescenza e velocità di attivazione in sessioni a tre settimane di distanza.
