Per iniziare, liquefare i campioni di sperma umano raccolti e omogeneizzarli accuratamente utilizzando una pipetta pasteur. Quindi trasferire 100 microlitri del campione di sperma in una provetta da centrifuga. A questa provetta, aggiungere 900 microlitri di soluzione colorante.
Miscelare ripetutamente mediante pipettaggio e omogeneizzare accuratamente il reagente. Posizionare il tubo su uno shaker bidimensionale per un'agitazione continua a 200 RPM per 30 minuti a temperatura ambiente. In attesa della reazione di colorazione, procedere all'analisi della concentrazione di spermatozoi utilizzando il sistema CASA.
Dopo aver acceso il sistema, fare doppio clic sull'icona SCAscope per aprire il software applicativo. Quindi, mescolare accuratamente il campione di sperma mediante pipettaggio e trasferire fino a 10 microlitri del campione sulla camera di conteggio SCA. Attendere 60 secondi affinché il campione di sperma smetta di andare alla deriva.
Successivamente, posizionare la camera di conteggio SCA sul portacampioni del sistema CASA. Nel software applicativo, inserire le informazioni del paziente nella finestra di dialogo. Fare clic sul pulsante di avvio per registrare la concentrazione di spermatozoi nello sperma.
Quindi, arrestare l'agitatore quando la reazione di colorazione di 30 minuti è completa. Prima dell'analisi, miscelare il contenuto della provetta da centrifuga mediante pipettaggio. Trasferire fino a 10 microlitri di reagente nella camera contaspermatica e coprirla con un vetrino coprioggetto dedicato.
Posizionare la camera per il conteggio degli spermatozoi sul tavolino microscopico e accendere il microscopio ottico. Quindi, attendere 60 secondi affinché il campione di reagente smetta di andare alla deriva. Sotto l'obiettivo 10x, regolare la rotta e le manopole di regolazione fine per selezionare un campo visivo.
Quindi passa all'obiettivo 40x e osserva gli spermatozoi e i leucociti positivi alla perossidasi. Utilizzare il sistema di conteggio elettronico per contare almeno 200 spermatozoi e il numero di leucociti positivi alla perossidasi nel marrone. Utilizzando questa tecnica, i leucociti positivi alla perossidasi sono stati colorati nel campione di sperma.
I leucociti positivi alla perossidasi mostravano una tonalità marrone in contrasto con le cellule rotonde, ordinarie e non colorate.
