Per iniziare, posizionare un mouse anestetizzato sul tavolo operatorio. Utilizzando forbici oftalmiche e pinze sterili, aprire le cavità toraciche e addominali. Questo esporrà il cuore e l'intestino.
Sezionare con cura le arterie mesenteriche e l'aorta separatamente. Sciacquare le arterie mesenteriche in PBS e trasferirle in una capsula di Petri da 10 centimetri contenente una soluzione di penicillina-streptomicina-amfotericina B all'1%. Allo stesso modo, sciacquare l'aorta e trasferirla in un'altra capsula di Petri contenente la stessa soluzione.
Rimuovere rapidamente tutto il grasso intorno all'aorta e alle arterie mesenteriche. Dopo aver risciacquato due volte, posizionare le arterie sotto uno stereomicroscopio in una cappa di coltura tissutale. Eseguire con cura un taglio longitudinale lungo le arterie.
Quindi, utilizzando una pinza fine, staccare lo strato esterno dell'aorta e il primo ramo delle arterie mesenteriche. Mettere lo strato esterno in una capsula di Petri da 3,5 centimetri contenente da 0,1 a 0,2 millilitri di terreno di coltura e tagliarlo in piccoli pezzi di circa un millimetro cubo. Trasferire i pezzi di tessuto in un pallone T-25 rivestito di gelatina.
Posizionare il pallone verticalmente in un'incubatrice a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica. Dopo tre ore, aggiungere cinque millilitri di terreno di crescita ad alto glucosio DMEM al pallone per immergere tutti i blocchi di tessuto.
