Per iniziare, isolare le cellule staminali CD34-positive della parete vascolare residenti da modelli murini. Ottenere cellule pure mediante smistamento cellulare attivato magneticamente e caratterizzarle. Per rilevare la segnalazione del calcio, procurarsi un vetrino coprioggetti pre-seminato con le cellule e lavarlo una volta con PBS.
Quindi incubare le cellule con la soluzione di Fura 2-AM e Tyrode per 30 minuti al buio. Per rimuovere il colorante, incubare le cellule con la soluzione di Tyrode per 10 minuti. Quindi monta la camera sul tavolino di un microscopio a fluorescenza invertita, apri la finestra principale e vai alla finestra di dialogo delle impostazioni di acquisizione e alla pagina della fotocamera.
Premere il pulsante live per la visualizzazione dell'immagine live. Per acquisire le immagini, disegna diverse linee a mano libera per cerchiare le celle con colori diversi e predefinire le regioni di interesse. La microscopia a fluorescenza ha dimostrato che la somministrazione di ATP ha aumentato i livelli intracellulari di calcio nelle cellule staminali CD34-positive della parete vascolare isolata.
