Iniziare mantenendo le cellule HEK293T e DMEM contenenti FBS inattivato dal calore, penicillina e streptomicina in un pallone T75. Per il conteggio delle cellule, mescolare 20 microlitri di sospensione cellulare con 20 microlitri di soluzione blu di tripano. Aggiungere 20 microlitri di sospensione cellulare mista a colorante nella camera di conteggio delle cellule e contare il numero di cellule per millilitro.
Seme HEK293T cellule e 10 millilitri di DMEM completo in una capsula di Petri per coltura cellulare di 10 centimetri. Incubare le cellule per una notte in un incubatore ad anidride carbonica a 37 gradi Celsius. Il giorno successivo, rimuovere il terreno completo e sostituirlo con nove millilitri di terreno privo di siero DMEM.
Utilizzando i composti dati dell'assemblaggio di particelle virali, preparare una miscela di cotrasfezione. Aggiungere lentamente la miscela alla capsula di Petri e incubare a 37 gradi Celsius per sei ore. Dopo l'incubazione, sostituire il DMEM privo di siero con un terreno DMEM completo e continuare l'incubazione per la cotrasfezione per un massimo di 48 ore.
Quindi staccare le cellule pipettando ripetutamente sulla superficie del monostrato e trasferire la sospensione in una provetta da 15 millilitri. Centrifugare la sospensione cellulare a 400 G per cinque minuti. Raccogliere il surnatante e farlo passare attraverso un filtro da 0,22 micron.
Conservare il filtrato contenente lo pseudovirus Ha-CoV-2 a 80 gradi Celsius.
