Analisi delle immagini in campo chiaro e in fluorescenza delle sezioni cerebrali di topo per la microscopia elettronica ed elettronica correlativa post-embedding dell'epone

Per iniziare, cattura le immagini in campo chiaro e fluorescente del tessuto cerebrale di topo che esprime mScarlet. Individua i dati grezzi per creare una mappa di navigazione di diverse immagini in campo chiaro di diversi campi visivi in ImageJ. Quindi apri ImageJ, naviga tra i plug-in, fai clic su stitching e seleziona grid o collection stitching.

Fare clic su Digita il serpente della griglia per colonna, selezionare l'ordine in alto e a sinistra e fare clic su Imposta dimensione sezione. Passare a selezionare il percorso dei dati e fare clic su imposta nome file, quindi selezionare la fusione del display. Per importare immagini in campo chiaro sequenziali di una cella specifica, fare clic su file e selezionare Importa, quindi su Sequenza di immagini.

Per la proiezione dell'intensità della somma di queste immagini, passare all'immagine, selezionare le pile, fare clic su Proiezione Z, quindi fare clic su Somma sezioni. Quindi selezionare modifica e fare clic su inverti per invertire l'immagine di proiezione dell'intensità della somma e migliorare la visibilità delle nanoparticelle d'oro. Successivamente, importa le immagini di fluorescenza sequenziali.

Per creare un'immagine di proiezione dell'intensità della somma, fare clic su immagine e selezionare le pile. Quindi vai alla proiezione Z, fai clic su somma sezioni e salva le immagini in formato TIF. Aprire le immagini di proiezione dell'intensità della somma delle immagini in campo chiaro e in fluorescenza.

Vai all'immagine, seleziona il colore e fai clic su Unisci canali per unire la proiezione dell'intensità della somma dell'immagine in campo chiaro con l'immagine della fluorescenza. Successivamente, seleziona l'immagine e fai clic sul tipo, seguito dal colore RGB per convertire il formato dell'immagine composita in RGB. Le nanoparticelle d'oro appariranno verdi e la proteina fluorescente apparirà rossa.

Quindi salva l'immagine come file TIF.