Registrazione dell'immagine al microscopio a fluorescenza con l'immagine al microscopio elettronico per la microscopia ottica ed elettronica correlativa

Per iniziare, apri il software di registrazione e cerca EasyCLIMv0. Una volta trovato, fare clic su EasyCLIMv0, fare clic su Immagine o Sequenza e selezionare Apri per importare l'immagine di microscopia elettronica e le immagini composite di immagini in campo chiaro e fluorescenti. Nell'interfaccia di EasyCLIMv0, fare clic su 2D XYT per selezionare il 2D non rigido o il 3D come modalità di allineamento.

Nella finestra EasyCLIMv0, fare clic sulla casella a discesa a destra dell'immagine selezionata che verrà trasformata e ridimensionata, probabilmente FM, per scegliere il tiff a colori RGB composito, quindi fare clic sulla casella a discesa a destra dell'immagine selezionata che non verrà modificata, probabilmente EM, per scegliere sei immagini tiff. Fare clic su Avvia per avviare il processo di registrazione. Nella finestra dell'immagine di microscopia elettronica sei immagine tiff, fare clic su una nanoparticella d'oro per posizionare 0,1 su di essa.

Nella finestra dell'immagine al microscopio a fluorescenza, il tiff a colori RGB composito. Fare clic sulla nanoparticella d'oro corrispondente per inserire 0,1 su di essa. Quindi fare clic su Aggiorna trasformazione per confermare l'allineamento dei segnali di fluorescenza e microscopia elettronica delle nanoparticelle d'oro e completare la registrazione facendo clic su Interrompi.

Per esportare la pila di immagini allineate contenente quattro immagini di canale, fare clic sull'immagine sovrapposta, selezionare Immagine o Sequenza, quindi fare clic su Salva con nome.Ora apri ImageJ, fai clic su File e seleziona Apri per importare l'immagine sovrapposta. Vai a Immagine, fai clic su Pile e poi impila due immagini per separarle in quattro immagini canale. Successivamente, selezionare Immagine e fare clic su Colore, quindi su Unisci canali per unire i tre canali in un'immagine composita.

Per convertire l'immagine composita in un'immagine di microscopia ottica ed elettronica correlativa, selezionare Immagine, quindi selezionare Tipo e fare clic su Colore RGB.