Per iniziare, prepara un flacone sterile di azoto con tappo e i flaconi di coltura e un flacone per la raccolta dei campioni. Far gocciolare il 100% di etanolo sui tappi e dar loro fuoco usando un accendino. Una volta che i tappi non sono più in fiamme, inserire una siringa da un millilitro dotata di un ago calibro 23 nella bombola di azoto e aspirare circa un millilitro di azoto.
Estrarre l'ago e premere lentamente lo stantuffo per rilasciare l'azoto. Inserire immediatamente l'ago nel flacone di raccolta del campione e prelevare 0,5 millilitri del campione ambientale. Inoculare il campione prelevato nel flacone di coltura contenente il terreno.
Agitare delicatamente il flacone e metterlo in un'incubatrice alla temperatura desiderata. La conta cellulare diretta prima dell'inoculazione era spesso inferiore al limite di rilevazione. Dopo l'inoculazione, la conta delle cellule è aumentata di oltre 10 milioni di cellule per millilitro nei giorni 30, 37 e 44.
Sebbene la conta cellulare fosse al di sotto del limite di rilevamento prima dell'aggiunta dell'inoculo, NGS ha indicato una presenza basale di microrganismi pre-inoculo nel sedimento e il genere principale geobacillus era stabile nei giorni otto, 15 e 22. Dopo l'inoculazione con l'inoculo BLM-1 il giorno 23, il geobacillo non dominava più e sorsero nuovi generi principali insieme a una moltitudine di generi presenti in modo minore.
