Per preparare una piastra da 24 pozzetti ricoperta di gelatina, aggiungere 200 microlitri della soluzione di gelatina allo 0,2% in ciascun pozzetto. Agitare delicatamente la piastra per distribuire uniformemente la soluzione e lasciare che i pozzetti si rivestano a temperatura ambiente. Dopo 15 minuti, utilizzando un aspiratore sottovuoto, rimuovere con cura la gelatina residua dai pozzetti.
Aggiungere 0,5 millilitri di terreno NBIL appena preparato a ciascun pozzetto. E posizionare la piastra in un'incubatrice per colture tissutali per preriscaldarla. Aliquotare 30 millilitri di materiale di lavaggio in un tubo conico da 50 millilitri.
Aspirare il terreno dalla piastra di coltura tissutale delle mESC e aggiungere la quantità richiesta di terreno di distacco cellulare. Dopo tre-cinque minuti, pipettare su e giù da 15 a 20 volte utilizzando una pipetta P1.000. Osserva le cellule al microscopio.
Per garantire una sospensione a cellula singola, trasferire la sospensione cellulare in un tubo da 50 millilitri contenente il mezzo di lavaggio. Centrifugare la sospensione a 300 g per cinque minuti a temperatura ambiente e aspirare il mezzo di lavaggio. Risospendere il pellet in circa 300 microlitri di materiale di lavaggio.
