Per iniziare, aliquotare 200 microlitri di materiale NBIL in provette da 1,5 millilitri. Aggiungere 26 microlitri della miscela ottimale di reagenti di trasfezione alla miscela ottimale di DNA. Convogliare vigorosamente i reagenti circa 10 volte.
Trasferire il volume richiesto di sospensioni di mPSC ai 200 microlitri di provette NBIL. Quindi aggiungere la lipofettamina 2000 e la miscela di DNA alle provette e mescolare bene mediante pipettaggio. Dopo cinque minuti, centrifugare la miscela a 300 G per cinque minuti e rimuovere il surnatante, lasciando circa 50 microlitri nella provetta.
Risospendere il pellet in 100 microlitri di materiale NBIL. Trasferire la sospensione cellulare su una piastra a 24 pozzetti ricoperta di gelatina e posizionare la piastra nell'incubatore. Trasferire il volume richiesto di sospensione di mPSC al seme di 25.000 cellule per pozzetto di una piastra a 24 pozzetti rivestita di gelatina e posizionare la piastra nell'incubatore.
Un'ora prima della trasfezione. Sostituire il terreno di s.p.a. dai pozzetti con 0,5 millilitri di terreno di coltura NBIL. Dopo l'incubazione, goccia a goccia, aggiungere ai pozzetti la lipofectamina 2000 e la miscela di DNA.
Mettere la piastra nell'incubatrice per 48 ore.
