Dopo la trasfezione delle mPSC, aspirare il terreno dalla piastra a sei pozzetti. Quindi aggiungere 200 microlitri di tripsina in ogni pozzetto. Agitare e incubare per 30 secondi a 37 gradi Celsius.
Picchiettare il lato della piastra e aggiungere 200 microlitri di tampone FACS ghiacciato. Utilizzando una pipetta P200, miscelare il contenuto di ciascun pozzetto per rimuovere le cellule e creare soluzioni a cellula singola. Trasferire 200 microlitri da ciascun pozzetto al pozzetto appropriato sulla piastra a 96 pozzetti Centrifugare la piastra a 300 G per cinque minuti.
Dopo la centrifugazione, risospendere i pellet in 150 microlitri di tampone FACS prima di eseguire il campione su un citometro a flusso. Rispetto alle trasfezioni inverse, le transezioni in avanti hanno mostrato una percentuale significativamente inferiore di cellule positive per il marcatore. È interessante notare che il Transfetto in avanti non ha fornito in media una quantità significativamente inferiore di DNA alla popolazione di cellule.
Nelle transezioni inverse, il tempo di incubazione ha influenzato significativamente la percentuale di cellule reporter positive. Tuttavia, l'espressione media del reporter nelle cellule positive non è stata influenzata dal tempo di incubazione. Sia per la politrasfezione che per la co-trasfezione, una trasfezione diretta ha ridotto significativamente il numero di cellule presenti all'endpoint scelto rispetto alle trasfezioni inverse.
Nel caso di poli-transezioni inverse, è stata osservata una maggiore efficienza di trasfezione e una gamma dinamica più ampia di rapporti di DNA ben rappresentati.
