Per iniziare, prendi le retine isolate in un piatto da 24 pozzetti riempito con acqua bidistillata. Quindi, sostituire l'acqua bidistillata con 800 microlitri di soluzione di tripsina YL e incubare a 37 gradi Celsius con agitazione delicata o senza agitazione per 4 ore e 15 minuti. Utilizzando la pipetta di trasferimento in vetro immersa nella soluzione di tripsina YL, trasferire la retina in una capsula di Petri da 35 millimetri contenente acqua bidistillata priva di lanugine.
Per rimuovere lo strato nucleare esterno, capovolgere la semisfera della retina verso il basso e utilizzare una spazzola liscia per capelli singoli per premerla delicatamente sul fondo del piatto. Utilizzare uno spazzolino ad anello per spazzolare delicatamente i fotorecettori della retina. Successivamente, per rimuovere il vitreo, capovolgere la semisfera della retina verso l'alto.
Utilizzare una pinza curva per afferrare il vitreo al microscopio da dissezione. Usando un'altra pinza curva, afferrare l'estremità del vitreo nel punto in cui collega il nervo ottico. Allontanare le due pinze l'una dall'altra per rimuovere e scartare il vitreo.
Quindi, capovolgi di nuovo la retina verso il basso e usa la spazzola dritta per premerla delicatamente sul fondo del piatto. Successivamente, utilizzare lo spazzolino ad anello per spazzolare la vascolarizzazione dalla testa del nervo ottico verso la periferia per rimuovere il tessuto neurale rimanente. Ruota lentamente la retina con lo spazzolino dritto e usa lo spazzolino ad anello per rimuovere tutti i piccoli pezzi di tessuto neurale fino a quando la rete vascolare non è pulita.
Per montare la vascolarizzazione retinica, utilizzare la spazzola ad anello per capovolgere la semisfera retinica rivolta verso l'alto e spingere delicatamente la vascolarizzazione verso il basso sul vetrino. Quindi usa i capelli per fissare la vascolarizzazione aperta al centro del vetrino. Spazzolare il vaso retinico a forma di ciotola dal nervo ottico alla periferia per montare in piano la vascolarizzazione.
Ripetere la spazzolatura in tutte le direzioni fino a quando la vascolarizzazione non si attacca completamente al vetrino.
