Per iniziare, posiziona il topo soppresso su una piattaforma chirurgica e apri la cavità toracica. Usando le forbici chirurgiche, fai un'incisione trasversale sotto la gabbia toracica e taglia le costole su ciascun lato del topo fino alla clavicola. Quindi tagliare il diaframma per rilasciare la parete toracica e sollevare le costole con una pinza per esporre la cavità toracica.
Tenere il timo con una pinza e tagliare delicatamente il tessuto connettivo che tiene il timo in posizione. Per eseguire la dissociazione enzimatica del tessuto timico murino, posizionare il timo pulito in un tappo in provetta da 15 millilitri e utilizzare forbici chirurgiche sterili per tritare finemente il tessuto. Aggiungere due millilitri di cocktail di dissociazione murina al tubo.
Attaccare il tappo contenente i pezzi di timo e capovolgere il tubo cinque volte per risospendere il tessuto. Avvolgere il tappo della provetta in una pellicola di paraffina. Dopo l'incubazione, posizionare la provetta in un rack e lasciare che il tessuto si depositi.
Rimuovere il surnatante e passarlo su un colino cellulare da 70 micrometri in una provetta ghiacciata da 50 millilitri. Quindi, aggiungere 20 millilitri di M1 99 con terreno FBS al 2% alla sospensione cellulare. Centrifugare la provetta a 500 G per cinque minuti a quattro gradi Celsius.
Dopo aver scartato il surnatante, risospendere il pellet in M1 99 e 2% FBS medium.
