Preparazione del campione per la citometria a flusso per misurare la fluorescenza di pHluorin2 in Trypanosoma brucei vivente

Per iniziare, prendi le cellule di Trypanosoma brucei che esprimono pHluorin. Aggiungere tetraciclina o doxiciclina e incubare durante la notte per indurre l'espressione di pHluorina. Quindi trasferire tre millilitri di ciascuna coltura in provette separate da 15 millilitri.

Quindi centrifugare le celle a temperatura ambiente per 10 minuti a 1000 xg. Rimuovere il surnatante e risospendere le cellule in un millilitro di PBS. Dopo aver centrifugato le cellule per la quarta volta, rimuovere il surnatante e risospendere il pellet cellulare in PBS con concentrazioni variabili di glucosio.

Aggiungere ioduro di propidio o rosso tiazolo per distinguere le cellule morte da quelle vive. Quindi trasferire ogni campione in provette da cinque millilitri compatibili con il citometro a flusso.