Per iniziare, trasferire 44 millilitri di terreno basale in una provetta da centrifuga da 50 millilitri. Aggiungere 5 millilitri di FBS al 10% al supporto. Quindi pipettare 0,5 millilitri ciascuno di penicillina, streptomicina e amfotericina B, soluzioni antibiotiche.
Centrifugare un flaconcino contenente una soluzione rapida di Dexstran a 1000 G per 30 secondi a 20 gradi Celsius. Aggiungere 175 microlitri di acqua al flaconcino per ottenere una concentrazione finale di 30 millimoli per litro. Ruotare il tubo per 30 secondi a velocità media fino a quando il materiale non è completamente sciolto.
Incubare il materiale disciolto su ghiaccio per cinque minuti. Centrifugare la provetta prima di vortex nuovamente il suo contenuto. Quindi posizionare il tubo sul ghiaccio fino a un ulteriore utilizzo.
Successivamente, centrifugare il reticolante per concentrare il materiale. Pipettare 188 microlitri d'acqua nel flaconcino reticolante per ottenere una concentrazione finale di 20 millimoli per litro di gruppi tiolici. Vorticare la soluzione reticolante fino a quando tutto il materiale non è sciolto.
Centrifugare la provetta dopo l'incubazione. Quindi vorticare brevemente prima di metterlo a temperatura ambiente fino a un ulteriore utilizzo. Successivamente, preparare la sospensione di cellule staminali derivate dal tessuto adiposo per 10 microlitri di idrogel come indicato nella tabella per creare una miscela principale.
Trasferire nove microlitri della miscela master in un pozzetto in una piastra a 96 pozzetti. Dopo tre minuti, aggiungere un microlitro di reticolante degradabile alla miscela per solidificare il gel. Pipetta. 170 microlitri di terreno di coltura completo preriscaldato sugli idrogel.
Sostituire il terreno di coltura dopo l'incubazione.
