Preparazione di cellule elettrocompetenti per ottenere l'espressione genica a singola copia in un ceppo batterico carente di efflusso

Per iniziare, posizionare tutte le provette sterili da 1,5 millilitri di microfuge e le cuvette sterili per elettroporazione sul ghiaccio. Quindi metti la bottiglia di acqua sterile, che è stata conservata a quattro gradi Celsius, sul ghiaccio. Trasferire 1,5 millilitri di coltura batterica durante la notte in una delle provette da 1,5 millilitri e centrifugare a 13.000 G per due minuti per pellettare le cellule.

Utilizzando una pipetta da un millilitro, rimuovere tutto il surnatante senza disturbare il pellet cellulare. Aggiungere altri 1,5 millilitri di coltura batterica nella stessa provetta per microfuge, centrifugare a 13.000 G per due minuti e rimuovere il surnatante. Aggiungere un millilitro di acqua sterile ghiacciata al pellet cellulare e risospendere con un pipettaggio delicato fino a quando il pellet non si trova più sul fondo del tubo del microfugo.

Centrifugare le cellule risospese a 13.000 g per due minuti e rimuovere con cautela il surnatante utilizzando una pipetta da un millilitro. Risospendere delicatamente il pellet cellulare finale in 200 microlitri di acqua sterile ghiacciata e trasferire 100 microlitri della sospensione cellulare finale nella seconda provetta microfuge ghiacciata da 1,5 millilitri.