Valutazione quantitativa della colonizzazione da Bacillus velezensis sulle radici di Arabidopsis thaliana

Per iniziare, pesare due provette da millilitri e registrare il peso iniziale come w0. Raccogli i tessuti radicali di Arabidopsis thaliana co-coltivati e lavali tre volte in acqua sterile. Metti la radice su carta da filtro per rimuovere l'acqua in eccesso.

Trasferire le radici nella provetta da microcentrifuga prepesata. Pesa le radici con il tubo e registralo come w1. Quindi, aggiungi 1 millilitro di PBS al tubo e Vortex per otto minuti alla massima velocità.

Diluire le sospensioni contenenti le cellule batteriche colonizzate dalla radice da 1 per 10 al 1° negativo a 1 per 10 al 5° negativo. Stendere le sospensioni batteriche diluite su piastre di agar Luria-Bertani e incubare a 37 gradi Celsius per 10 ore. Dopo l'incubazione, contare le colonie batteriche su piastre di agar Luria-Bertani.

Calcolare le unità formanti colonie in base alla diluizione corrispondente e normalizzare i dati con il peso fresco della radice per ottenere un conteggio delle cellule batteriche colonizzate per grammo di radice. A due giorni dall'inoculazione, la colonizzazione di Bacillus velezensis wild type SQR9 e di un mutante derivato, delta 8mcp, ha dimostrato una significativa riduzione della colonizzazione radicale di delta 8mcp, suggerendo l'efficacia di questa condizione e del metodo nella misurazione della colonizzazione batterica.