Per iniziare, procurati il topo soppresso somministrato con i plasmidi appropriati. Per la preparazione del piatto di coltura, aggiungere 1,9 millilitri di terreno di coltura a un piatto a base di vetro e applicare con cura un inserto di coltura cellulare su di esso. Quindi aggiungere 500 microlitri di terreno di coltura sul filtro e posizionarlo sul ghiaccio.
Rimuovere gli embrioni e metterli in una capsula di Petri contenente PBS ghiacciato. Al microscopio, selezionare gli embrioni in base all'espressione della proteina fluorescente verde o di altri marcatori fluorescenti. Dopo aver sezionato il cervello, metterlo in gel di agarosio fuso preso in uno stampo criogenico e arrotolarlo più volte.
Una volta che l'agarosio si sarà solidificato a temperatura ambiente, mettetelo sul ghiaccio. Usando un microtomo vibrante, affettare i cervelli coronalmente a uno spessore di 350 micrometri e disporli sul filtro. Quindi rimuovere 600 microlitri di terreno di coltura sia dall'interno che dall'esterno della tazza del filtro.
Dopo cinque minuti, aggiungere 100 microlitri di terreno di coltura fresco all'interno dell'inserto di coltura cellulare. Per l'imaging time-lapse, acquisisci immagini stack a circa 10Z utilizzando un obiettivo 20X a lunga distanza di lavoro. L'analisi delle immagini time-lapse del cervello di topo ha fornito le traiettorie delle cellule migranti EGFP positive e delle cellule migratorie RFP positive da due a 21 ore.
