Per iniziare, inoculare una singola colonia di OP50 in cinque millilitri di LB con ampicillina e amfotericina B e incubare per circa sei ore a 37 gradi Celsius in un agitatore batterico. Una volta che la coltura diventa torbida, diluire la coltura preinoculum di OP50 da 1 a 2.000 in 250 millilitri di TB con ampicillina e glicerolo. Quindi trasferire la coltura liquida OP50 in una provetta da centrifugazione sterile.
Centrifugare la provetta per 15 minuti a 3, 100 G in una centrifuga da tavolo a quattro gradi Celsius. Scartare il surnatante e risospendere il pellet OP50 in acqua sterile prima della ricentrifugazione. Dopo il secondo lavaggio, scartare il surnatante e risospendere il pellet OP50 in acqua sterile fino a un volume di 50 millilitri.
Trasferirlo in una provetta conica da 50 millilitri pre-pesata. Centrifugare la provetta per 20 minuti per pellettare l'OP50. Al termine della centrifugazione, rimuovere con cura tutto il surnatante rimasto, assicurandosi che non rimanga acqua nella provetta.
Calcolare il peso del pellet sottraendo il peso della provetta da centrifugazione vuota dal peso della provetta da centrifugazione con il pellet. Risospendere accuratamente il pellet OP50 nel tampone S-complete per ottenere una concentrazione di 100 milligrammi per millilitro. Testare la sospensione OP50 su una piastra di agar per verificare la presenza di eventuali contaminazioni.
Conservare la sospensione OP50 in un tampone S-complete a quattro gradi Celsius.
