Per iniziare, inserire il fondo di un puntale per pipetta tagliato da 200 microlitri in un dispositivo di intrappolamento microfluidico prefabbricato. Pipettare, utilizzando una siringa dotata di filtro da 0,2 micrometri, iniettare 400 microlitri di soluzione di beta caseina nel serbatoio di ingresso del chip. Centrifugare il chip a 900 G per sei minuti.
Il livello del liquido dovrebbe ora essere uguale sia in ingresso che in uscita. Disegna un contorno del distanziatore su due vetrini dell'obiettivo. Pulire i vetrini con plasma ad alto contenuto di ossigeno per un minuto per renderli idrofili.
Aggiungere l'agarosio a bassa temperatura di gelificazione sulla parte superiore del vetrino fino a ricoprirlo completamente di agarosio. Quindi inclinare il vetrino con un angolo di 90 gradi e drenare l'agarosio in eccesso su un fazzoletto. Posizionare i vetrini a 50 gradi Celsius per 30 minuti.
Con un sonicatore a sonda portatile, dotato di una sonda da un millimetro, sonicare i proteoliposomi preparati. Tieni i SUV proteo sul ghiaccio per 30 secondi prima di ripetere la sonicazione cinque volte. Con una siringa da 100 microlitri, depositare 0,5 microlitri di goccioline dei proteo SUV su un gel di agarosio preparato.
Utilizzare il flusso di azoto per circa 10 minuti per asciugare le goccioline. Con una siringa e un ago, pipettare la soluzione di rigonfiamento in una camera preparata attraverso un piccolo foro sul lato e lasciare che le vescicole si gonfino a 22 gradi Celsius per almeno 30 minuti. Picchiettare la camera su una superficie solida per raccogliere i GUV dal gel.
Per intrappolare i GUV per la microscopia, montare un chip microfluidico passivato su un microscopio. Dopo aver verificato la presenza di difetti, collegare il tubo con un ago piegato all'uscita del serbatoio. Dopo aver collegato l'altra estremità a una siringa da un millilitro, montare la siringa su una pompa con una portata massima di 10 microlitri al minuto.
Sostituire il tampone di lavaggio del serbatoio con un terreno fresco. Lavare con almeno 80 microlitri di tampone P.Dopo aver rimosso il tampone in eccesso, aggiungere i proteo GUV al serbatoio. Monitora il chip nel tempo fino a quando non sono rimasti intrappolati abbastanza GUV nel chip.
Pipettare la soluzione GUV in eccesso. Quindi aggiungere il tampone di lavaggio P a una velocità di flusso da 0,1 a un microlitro al minuto. Infine, localizzare le trappole con una quantità sufficiente di vescicole.
Dopo aver applicato le impostazioni al microscopio, aggiungere il tampone R al serbatoio a una portata di 0,5 microlitri al minuto. La reidratazione dei LUV proteo essiccati su un gel di agarosio a bassa temperatura di gelificazione ha portato alla formazione di vescicole di dimensioni micrometriche. I GUV sono stati raccolti e intrappolati in un dispositivo microfluidico passivato con beta caseina.
