Un mese dopo l'esposizione alla LISW, condurre un esame patologico della coclea del topo. Iniziare l'emoperfusione con la soluzione di Ringer lattata, seguita dalla perfusione transcardiaca con paraformaldeide al 4%. Dopo la decapitazione del topo, rimuovere la coclea e perfondere direttamente con il 4% di paraformaldeide a quattro gradi Celsius durante la notte.
Dopo aver acquisito l'intera immagine della coclea, utilizzando il software ImageJ, calcolare la mappa delle frequenze cocleari per localizzare con precisione le specifiche regioni cocleari a diverse frequenze. Utilizzando la formula data, calcola il tasso di sopravvivenza delle cellule ciliate ad ogni frequenza. Dopo aver acquisito immagini Z-stack ad alta risoluzione delle cellule ciliate interne, calcolare il numero di sinapsi.
Visualizza le sezioni della coclea colorate con ematossilina ed eosina e conta il numero di neuroni gangliari spirali nel giro centrale del canale di Rosenthal per calcolare la sopravvivenza dei neuroni gangliari spirale per controllo. Rispetto al controllo, l'immunocolorazione fluorescente ha mostrato strutture cocleari intatte senza perdita significativa di cellule ciliate o fibre nervose in tutti i gruppi. Tuttavia, le valutazioni quantitative hanno indicato che la sopravvivenza delle cellule ciliate esterne era significativamente inferiore nel gruppo di 2,5 joule per centimetro quadrato.
Nel frattempo, la sopravvivenza delle cellule ciliate interne era coerente tra i gruppi. La conta dei nastri sinaptici era notevolmente ridotta nei gruppi a frequenza più elevata. Ciò è stato parallelo a una diminuzione della densità dei neuroni gangliari a spirale nel gruppo di 2,5 joule per centimetro quadrato, indicando che la degenerazione cocleare dipende dall'esposizione all'energia LISW.
