Dopo aver anestetizzato e rimosso i peli del topo, posizionarlo su un termoforo avvolto in un tappetino chirurgico per autoclave. Raddrizzare delicatamente il corpo e sollevare la pelle lungo la colonna vertebrale. Usa un pennarello chirurgico per disegnare un singolo punto su un lato del mouse al centro della pelle a tenda.
Dopo aver coltivato il BXPC, tre linee cellulari di cancro al pancreas umano per due settimane. Estrarre il pallone dall'incubatrice e inserirlo nella cabina di sicurezza biologica. Aspirare il terreno e lavare le cellule con cinque millilitri di PBS.
Aggiungere cinque millilitri di agente di dissociazione cellulare nel pallone e incubare a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica per sei-sette minuti. Trasferire la sospensione cellulare in una provetta da 15 millilitri e centrifugare a 500 G per cinque minuti. Dopo aver rimosso il surnatante, risospendere le cellule in un terreno di crescita completo.
Utilizzando un emocitometro, determinare la concentrazione cellulare e la conta cellulare totale. Centrifugare una sospensione da 1,5 millilitri contenente 250.000 cellule per topo da inoculare a 500 G per cinque minuti. Dopo aver rimosso il surnatante, risospendere il pellet in 10 microlitri di PBS per topo da inoculare e posizionare la provetta sul ghiaccio.
Utilizzando i puntali delle pipette refrigerati, aggiungere una membrana basamentale solubilizzata nella provetta. Caricare l'ago da insulina freddo da 29 gauge con 20 microlitri di sospensione cellulare e posizionare la siringa sul ghiaccio. Inserire l'ago di circa un centimetro nel punto di riferimento del mouse e spostare l'ago sotto la pelle fino a raggiungere il punto di riferimento, con il lato smussato dell'ago verso l'alto.
Iniettare 20 microlitri di sospensione cellulare e attendere 45 secondi prima di rimuovere la siringa. Dopo aver tolto il topo dall'anestesia, attendere che diventi deambulante prima di tornare nella sua gabbia di casa.
