Amplificazione PCR e legatura dell'adattatore della sequenza bersaglio per la rilevazione di SNP multigenico nel carcinoma gastrico

Per iniziare, prelevare gli acidi nucleici estratti dai campioni di tessuto del cancro gastrico inclusi in paraffina. Posizionare i componenti del kit di rilevamento multigenico dell'articolazione multigenica per il cancro gastrico su misura sul ghiaccio. Dopo aver miscelato accuratamente i componenti, centrifugarli per 10 secondi, quindi aggiungere i reagenti in una provetta PCR da 0,2 millilitri in sequenza e mescolare per cinque secondi mediante vortex.

Posizionare ogni provetta di reazione sul termociclatore ed eseguire il programma di amplificazione per i campioni di DNA e i prodotti a base di cDNA. Scongelare l'enzima di digestione del primer sul ghiaccio. Aggiungere due microlitri di enzima di digestione primer a ciascuna provetta di reazione.

Dopo aver agitato e centrifugato le provette, posizionarle sul termociclatore ed eseguire il programma di digestione. Scongelare l'adattatore che collega i reagenti sul ghiaccio. Etichettare una provetta per microcentrifuga da 1,5 millilitri come miscela adattatore X e aggiungere i componenti necessari.

Prelevare il prodotto primer digerito dal termociclatore. Aggiungere i reagenti di legatura alla provetta, agitare per cinque secondi e centrifugare a bassa velocità per 10 secondi a 2.500 G.Quindi posizionare la provetta sul termociclatore ed eseguire il programma di amplificazione per i campioni di DNA e per i prodotti a base di cDNA.