Per iniziare, posizionare il Biochips modello BC002 in una capsula di Petri di vetro e lavare tutte le cavità con etanolo sterile al 70% per 45 minuti. Quindi sciacquare le cavità due volte con acqua sterile a doppia distillazione. Utilizzando una pipetta da 1.000 microlitri con punte blu, rivestire la membrana del biochip della cavità superiore con una soluzione sterile di collagene IV.
Incubare il chip per 30 minuti a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. Dopo l'incubazione, sciacquare due volte le camere inferiore e superiore con PBS sterile contenente magnesio e calcio. Riempire la camera superiore di ciascuna cavità con 250 microlitri di cellule endoteliali o terreno EC contenente penicillina streptomicina e la camera inferiore con 150 microlitri.
Lavare la coltura di cellule endoteliali della vena ombelicale umana confluente in un pallone T25 con cinque millilitri di DPBS senza magnesio e PBS di calcio. Aggiungere un millilitro di tripsina 0,25 e un millimolare di EDTA in PBS. E incubare per tre minuti a 37 gradi Celsius.
Dopo l'incubazione, aggiungere cinque millilitri di PBS e il 5% di FCS per fermare l'attività della tripsina. In una provetta conica da 50 millilitri, centrifugare la sospensione a 350 G per cinque minuti. E ri-sospendere il pellet in un millilitro di mezzo EC.
Aggiungere 10 microlitri di sospensione cellulare diluita da uno a 10 in una provetta da microcentrifuga contenente 10 microlitri di colorante blu di tripano. Contare le celle manualmente con una camera Neubauer. Dopo il conteggio, sostituire il terreno cellulare endoteliale nella camera superiore del biochip con 200 microlitri di terreno EC contenente 0,4 volte 10 alla potenza di sei colture di cellule endoteliali della vena ombelicale umana.
Posizionare la capsula di Petri in vetro con i biochip a 37 gradi Celsius e il 5% di anidride carbonica. Eseguire lo scambio giornaliero del terreno con 300 microlitri di terreno EC per la camera superiore e 200 microlitri di terreno RPMI+ per la camera inferiore. Dopo aver lavato i monociti con un millilitro di PBS, incubarli in PBS preriscaldato contenente lidocaina e EDTA a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica per sette minuti.
Raccogliere e centrifugare le celle a 350 G per sette minuti. Dopo la risospensione in un millilitro di RPMI+, contare le cellule come dimostrato in precedenza. Seme 0,1 per 10 alla potenza di sei monociti sospesi in 200 microlitri di RPMI+ nella camera inferiore.
Posizionare le porte del biochip rivolte verso il basso in modo che le cellule si attacchino alla membrana.
