Dissezione dell'occhio intero di coniglio e preparazione del tessuto oculare per l'analisi istologica

Dopo l'enucleazione transcongiuntivale dell'occhio di coniglio, inserire immediatamente 50 millilitri di paraformaldeide al 4% e PBS su ghiaccio. Dopo 15 minuti, trasferire l'occhio in una capsula di dissezione da 100 millimetri e riempire la capsula con PBS per evitare che l'occhio si secchi. Al microscopio da dissezione, utilizzando una lama chirurgica, iniziare a praticare un'incisione un millimetro anteriormente al limbus, mantenendola parallela al piano dell'iride.

Inserire le forbici curve nell'incisione iniziale e continuare a tagliare circonferenzialmente, mantenendo una distanza di un millimetro dal limbus. Quindi rimuovere la cornea con una pinza e asciugare delicatamente la PBS con una salvietta da laboratorio. Posizionare la cornea in una soluzione di saccarosio al 30% a temperatura ambiente per la crioprotezione.

Fai un taglio iniziale con le forbici curve attraverso l'iride. Quindi tagliare circonferenzialmente intorno all'occhio, in modo simile alla rimozione della cornea, per separare l'iride dal resto del tessuto. Rimuovere l'iride con una pinza e rimuovere delicatamente il PBS in eccesso con la salvietta da laboratorio.

Posizionare l'iride in una soluzione di saccarosio al 30% a temperatura ambiente per la crioprotezione. Dopo aver rimosso la cornea e l'iride, immergere l'occhio in 50 millilitri di paraformaldeide al 4% e metterlo su uno shaker per una leggera agitazione. Lasciare l'occhio in paraformaldeide al 4% a quattro gradi Celsius durante la notte.

Il giorno successivo, posizionare l'occhio in una capsula di dissezione e riempire la capsula con PBS. Sotto il microscopio da dissezione, utilizzare una pinza per afferrare con cura la capsula anteriore del cristallino. Quindi inserire con cautela le forbici nella camera posteriore, orientando le lame posteriormente lungo la lente.

Eseguire un taglio iniziale attraverso le zonule della lente con le forbici curve. Continuare a fare piccoli tagli in uno schema circonferenziale attraverso le zonule della lente. Per confermare la rimozione della lente, afferrare delicatamente la capsula anteriore della lente con una pinza e tentare di sollevarla.

Dopo la separazione, posizionare la lente in una soluzione di saccarosio al 30% a temperatura ambiente per la crioprotezione. Posizionare l'occhio in 50 millilitri di saccarosio al 30% e PBS a quattro gradi Celsius per 24-48 ore per la crioprotezione. Per accelerare la crioprotezione, sostituire la soluzione iniziale di saccarosio con una nuova dopo otto-12 ore.