Per iniziare, posizionare due piastre da 96 pozzetti, una vasca di caricamento e puntali per pipette multicanale all'interno della cappa per PCR. Dopo aver etichettato ciascuna targa, ruotare la piastra 1 di 180 gradi in modo che i numeri delle colonne siano capovolti lasciando la targa 2 rivolta verso il tecnico. Quindi versare la provetta da cinque millilitri della master mix MM qPCR preparata nella mangiatoia di carico.
Utilizzare una punta per pipetta per assicurarsi che tutta la soluzione dal tubo venga trasferita. Collegare i puntali alla pipetta multicanale, premendo alla base di ciascun puntale per garantire una tenuta ermetica. Utilizzando il pipettaggio inverso, erogare la miscela master in tutte le colonne pari o dispari, alternando le due piastre.
Dopo aver agitato e centrifugato le strisce PCR, disporle nel rack delle provette nell'ordine in cui verranno posizionate sulle piastre. Ora ruotare entrambe le piastre di 180 gradi in modo che i numeri di colonna siano invertiti rispetto al tecnico. Utilizzare la pipetta multicanale per risospendere le soluzioni nelle strisce PCR.
Utilizzando il pipettaggio inverso, riempire le prime tre colonne di ciascuna piastra con la striscia A per PCR, alternando colonne pari o dispari come il posizionamento della miscela master. Utilizzando una pipetta da 200 microlitri impostata su 90 microlitri, risospendere accuratamente la settima provetta di diluizione standard nella striscia S per PCR e riempire le colonne dalla quarta alla sesta sulle piastre. Dopo aver riempito le piastre, picchiettarle delicatamente sul piano di lavoro per assicurarsi che il liquido nei pozzetti si depositi sul fondo.
Quindi coprire la parte superiore delle piastre con pellicole sigillanti, premendo su tutti i bordi della pellicola con la punta delle dita per garantire una tenuta ermetica. Per mescolare il contenuto dei piatti, farli roteare sulla parte superiore della cappa per 30 secondi. Quindi posizionare le piastre sigillate nella rotella per due minuti con le aperture del pozzetto rivolte verso il centro.
Posizionare ora le piastre nel termociclatore assicurandosi che i numeri delle colonne siano leggibili. Pulire la parte superiore di ogni piastra con un fazzoletto pulito prima di chiudere la parte superiore del termociclatore. Quindi fare clic sul pulsante Avvia esecuzione sul software del termociclatore per entrambe le macchine.
Quando richiesto, immettere un titolo per i file di analisi, che verrà utilizzato per etichettare e tenere traccia dei dati di questo esperimento.
