Estrazione di DNA da campioni di espettorato umano per la rilevazione rapida di agenti patogeni batterici utilizzando un chip microfluidico

Per iniziare, pulire la cavità orale e i denti con acqua pulita. Chiedi ai pazienti con protesi dentarie di rimuoverle. Istruire il paziente a tossire con forza per espellere l'espettorato respiratorio profondo in un contenitore per l'espettorato.

Per estrarre il DNA, aggiungere un volume appropriato di idrossido di sodio al 10% al campione in base alla sua viscosità. Agitare la sospensione per 15 secondi, quindi incubarla a 37 gradi Celsius per 30 minuti per liquefare il campione. Quindi, pipettare un millilitro del campione liquefatto in una provetta da centrifuga da 1,5 millilitri.

Centrifugare il campione a 15.777 G per cinque minuti a una temperatura compresa tra due e sei gradi Celsius. Quindi pipettare il surnatante per scartarlo. Ora, aggiungi un millilitro di soluzione di lavaggio al tubo e agitalo per sollevare il precipitato dal fondo del tubo.

Dopo aver centrato ed eliminato il surnatante come prima, pipettare 100 microlitri di soluzione di estrazione dell'acido nucleico nel pallet. Con una pipetta, aspirare e mescolare accuratamente il precipitato con la soluzione. Trasferire il liquido e precipitare insieme in una provetta per l'estrazione dell'acido nucleico.

Mettere il tubo in un miscelatore a vortice a velocità media per cinque minuti. Quindi, trasferire il tubo in un bagno di metallo a una temperatura costante di 100 gradi Celsius per cinque minuti. Infine, centrifugare i campioni a 15.777 G per cinque minuti a una temperatura compresa tra due e sei gradi Celsius prima di ulteriori esperimenti.