Per preparare il microago di vetro, posizionare i capillari di vetro borosilicato nell'alveolo polare. Dopo aver impostato i parametri richiesti, premere il pulsante di trazione per generare l'ago. Quindi, dividere le cellule staminali positive alla GFP in una provetta.
Dopo il conteggio e la pellettatura, risolubilizzarli alla concentrazione desiderata. Trasferire la sospensione cellulare in una provetta da 1,5 millilitri e posizionarla sul ghiaccio per il trapianto. Utilizzando una micropipetta, caricare quattro microlitri di sospensione cellulare in un microago di vetro.
Inserire l'ago nell'apposito supporto sul microiniettore e, utilizzando una pinzetta diritta, rompere la punta dell'ago. Impostare la pressione su 10 PSI. Utilizzando una pipetta Pasteur, applicare una goccia di olio minerale su un vetrino calibrato e microiniettare la sospensione cellulare nella goccia per annotare il diametro per la calibrazione del volume di iniezione.
Dopo aver impostato il volume corretto, microiniettare rapidamente la sospensione cellulare nella fetta. Sotto lo stereomicroscopio a fluorescenza, verificare la presenza delle cellule nelle fette e incubarle a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica.
