Preparazione e trasfezione di celle HEK-293T per l'analisi di smistamento FACS

Inizia coltivando le cellule T HEK 293 in terreno DMEM, integrato con il 10% di siero fetale bovino. Il giorno prima della trasfezione, seminare le cellule T HEK 293 in una piastra a sei pozzetti per raggiungere una confluenza di circa il 60% il giorno successivo. Quindi trasfettare le cellule del campione sperimentale in una piastra a sei pozzetti con plasmidi per il test NHEJ o HR utilizzando un kit di trasfezione commerciale.

Per i controlli di calibrazione facs, lasciare un pozzetto di celle non trasfettate come controllo negativo. Trasfettare le cellule in una piastra a sei pozzetti con plasmidi per GFP, controllo a colore singolo, o mCherry, controllo a colore singolo.