Trasformazione su larga scala di plasmidi UAS-cDNA/ORF da assemblaggio modulare basato su CRISPR in E. coli

Per trasformare i plasmidi UAS cDNA/ORF ottenuti dall'assemblaggio modulare basato su CRISPR in Escherichia coli, pre-raffreddare i puntali da 10 microlitri a quattro gradi Celsius. Inoltre, pre-raffreddare i tubi da 1,5 millilitri in un blocco di raffreddamento in alluminio su ghiaccio. Dopo aver scongelato le cellule di E.coli competenti su ghiaccio per cinque minuti, aggiungere un'aliquota di 10 microlitri di cellule a ciascuna provetta pre-raffreddata da 1,5 millilitri.

Quindi aggiungere un microlitro di prodotti plasmidici UAS cDNA/ORF a ciascuna provetta contenente 10 microlitri di cellule competenti. Agitare delicatamente il tubo per mescolare e metterlo sul ghiaccio per 30 minuti. Incubare le provette a 42 gradi Celsius a bagnomaria per un minuto.

Quindi raffreddare immediatamente con ghiaccio per due minuti. Aggiungere 100 microlitri di terreno SOC, preriscaldato a 37 gradi Celsius, a ciascuna provetta a temperatura ambiente e incubare le provette in un incubatore agitato a 250 giri/min e 37 gradi Celsius per un'ora. Quindi, riscalda le piastre LB contenenti un antibiotico corrispondente al gene di resistenza agli antibiotici del modulo UAS a 37 gradi Celsius.

Distribuire le cellule sulle piastre calde e incubarle a 37 gradi Celsius per una notte.