Polverizzazione e omogeneizzazione di campioni di tessuto adiposo intermuscolare umano congelato per l'isolamento dei nuclei

Per iniziare, riempire il contenitore con azoto liquido, posizionare mortai, pestelli, micro palette, spatola, piumini di vetro, pestello in acciaio inossidabile e deprimente automatico sulla piattaforma di lavoro. Pre-raffreddare il bicchiere in un bicchiere pieno di ghiaccio. Riempire i due mortai contenenti il pestello e la spatola con azoto liquido per raffreddare gli strumenti.

Nel frattempo, aggiungere un millilitro di tampone di omogeneizzazione ai fondi di vetro. Riempire entrambi i mortai con azoto liquido e versare i 50 milligrammi di campione di tessuto adiposo intermuscolare umano in uno dei mortai. Per la polverizzazione, premere delicatamente il pestello sul pezzo di tessuto per romperlo in piccoli pezzi.

Una volta che il tessuto è polverizzato, rimane ancora da un quarto alla metà di un mortaio di azoto liquido. Inclinare il mortaio raccogliendo il tessuto polverizzato nel labbro del mortaio. Una volta evaporato l'azoto liquido, raccogliere il tessuto polverizzato nei fondi di vetro contenenti il tampone di omogeneizzazione.

Sul downer automatico. Muovi il bicchiere verso il basso e verso il basso del pestello in acciaio inossidabile per 10 colpi in avanti, seguiti da 10 colpi in senso inverso. Una volta che la soluzione è torbida e priva di frammenti di tessuto visibili, trasferirla in una provetta pre-raffreddata da 1,7 millilitri a bassa legatura su ghiaccio.

Sciacquare i piumini con 400 microlitri di tampone di omogeneizzazione e trasferirlo in una provetta a basso legante.