Procedura di fissazione e post-fissazione dell'organoide retinico per la preparazione del campione TEM

Iniziare la fissazione anteriore degli organoidi retinici o RO derivati da cellule staminali pluripotenti indotte. Utilizzando una pipetta, spostare delicatamente uno degli RO coltivati dalla piastra di Petri a una provetta da microcentrifuga da 1,5 millilitri. Con l'aiuto di una pipetta, rimuovere il terreno di coltura dalla provetta da microcentrifuga e aggiungere 1,5 millilitri di fissativo paraformaldeide al 2% e glutaraldeide al 2%.

Dopo aver fissato gli RO, rimuovere il fissativo paraformaldeide-glutaraldeide prima di procedere al lavaggio degli organoidi. Sospendi delicatamente gli organoidi nella provetta da microcentrifuga aggiungendo 1 millilitro di PBS molare da 0,01 per garantire un lavaggio completo. Quindi pipettare il PBS rimanente e sostituirlo con circa 150 microlitri di acido osmico all'1% fino a sommergere i blocchi di tessuto.

Metti la provetta per microcentrifuga in una scatola scura.