Inclusione di organoidi retinici e posizionamento di fette semisottili per microscopia elettronica a trasmissione

Per iniziare, aggiungi resina epossidica pura alla scanalatura dello stampo per inclusione fino a due terzi del suo volume. Utilizzare uno stuzzicadenti per prelevare gli organoidi retinici e trasferirli nello stampo da inclusione, dotato di resina epossidica pura. Quindi riempire la scanalatura con resina epossidica pura fino a quando non sporge o si gonfia leggermente.

Regolare la posizione degli organoidi su entrambe le estremità dello stampo di inclusione per l'inclusione direzionale. Installare il blocco di inclusione nel supporto di montaggio del campione e avvitare il bullone con un cacciavite a L. Quindi installare i coltelli di vetro sul supporto per coltelli e serrare manualmente il dado.

Taglia via la resina in eccesso fino a quando l'area desiderata non è esposta. Riempi d'acqua la mangiatoia del coltello di vetro. Utilizzando un microtomo semisottile, tagliare delle fette semisottili a uno spessore di un micron e adagiarle su un vetrino da microscopio con un ago.

Aggiungere 50 microlitri di blu di toluidina all'1% per tingere le fette semisottili e incubare per un minuto a 95 gradi Celsius sulla piastra riscaldante. Risciacquare con acqua distillata per due minuti. Utilizzare un normale microscopio ottico 20x per osservare la struttura delle sezioni.