Dopo l'eutanasia del topo, sezionare i muscoli TA e GA da entrambi gli arti posteriori e metterli nel coperchio di una capsula di Petri. Usa le forbici per tagliare il tessuto in un impasto tritato. Trasferire il tessuto tritato in una provetta da 50 millilitri contenente cinque millilitri di tampone di dissociazione ghiacciato e tenerlo in ghiaccio.
Una volta che le provette del campione sono state riscaldate a 37 gradi Celsius, incubarle per 45 minuti a rotazione in un incubatore. Aggiungere 10 millilitri di terreno di lavaggio alle provette del campione e agitarle. Centrifugare le provette e aspirare il contenuto a quattro millilitri.
Quindi, aggiungere 0,5 millilitri ciascuno di collagenasi e dispase alle cellule. Quindi, vorticali e incubali. Dopo l'incubazione, centrifugare il campione digerito e risospendere il pellet con una pipetta da cinque millilitri.
Successivamente, pre-bagnare i filtri cellulari da 40 micrometri posizionati su provette da 50 millilitri con cinque millilitri di mezzo di lavaggio. Utilizzando una siringa da cinque millilitri con un ago calibro 20, aspirare ed espellere la sospensione cellulare 10 volte. Quindi, filtrare la sospensione cellulare attraverso il filtro cellulare da 40 micrometri pre-bagnato.
Dopo aver raccolto e filtrato le cellule rimanenti con 10 millilitri di mezzo di lavaggio, pellettare la sospensione cellulare mediante centrifugazione, aspirare il surnatante dal tubo e muovere delicatamente il pellet per allentarlo.
