Per iniziare, con un paio di forbici e una pinza smussata, solleva e taglia la pelle di un topo anestetizzato sopra la vena giugulare destra. Taglia una finestra rotonda nella pelle abbastanza grande da esporre la vena giugulare e parte del tessuto circostante. Spingere delicatamente da parte il tessuto adiposo, i linfonodi e il tessuto connettivo utilizzando la tecnica della dissezione smussata.
Quindi, riempire una siringa da 20 millilitri con soluzione fisiologica normale riscaldata a 37 gradi Celsius. Caricare la siringa nella pompa di infusione della siringa. Quindi collegare un ago a farfalla calibro 27 e il tubo associato alla siringa.
Impostare la pompa a siringa su una portata di 0,5 millilitri al minuto per lavare via il sangue dalla vena o dall'arteria perforata. Posizionare il getto di soluzione salina di alcuni millilitri a lato del sito di puntura e non direttamente sopra di esso. Una volta pulita la vena giugulare, avviare il timer.
Procurati aghi ipodermici da 30 e 33 gauge rispettivamente per la vena giugulare e l'arteria femorale. Ruotare lo smusso in modo che sia rivolto verso l'alto. Quindi posizionare l'ago con un angolo di 25 gradi sopra la vena giugulare o l'arteria femorale.
Dopo aver annotato l'ora, forare rapidamente la parte superiore del recipiente. Prendere nota del tempo necessario affinché l'emorragia si fermi completamente. Attendere la formazione di un trombo prima di iniziare la fissazione della perfusione.
Una volta completata la perfusione, sezionare la parte della vena giugulare con il sito di puntura e il trombo. Usa un paio di forbici affilate per eseguire un taglio diagonale attraverso l'estremità distale del segmento del vaso e fai un taglio dritto attraverso l'estremità prossimale del segmento del vaso. Quindi, posizionare il tessuto fissato a quattro gradi Celsius per 24 ore.
Il giorno successivo, versare la soluzione tampone di cacodilato di sodio in un piatto di coltura da 35 millimetri contenente un tappetino di silicone spesso cinque millimetri. Trasferire con cura il tessuto nel tampone, assicurandosi che sia immerso nel tampone. Con perni in acciaio inossidabile e un paio di pinze sottili, fissare con cura ciascuna estremità del recipiente al tappetino.
Pulire accuratamente la vena giugulare. Con un paio di micro forbici, tagliare longitudinalmente la parete del vaso opposta al sito di puntura. Aprire delicatamente il recipiente, quindi fissarlo al tappetino in silicone con il lato intraluminale rivolto verso l'alto.
Rimuovere la soluzione tampone dal piatto. Quindi aggiungere l'1% di paraformaldeide per immergere il recipiente. Posizionare immediatamente il coperchio sul piatto per evitare che si secchi.
