Per iniziare, preparare una diluizione da 1 a 100 di una soluzione madre di collagene in DPBS con magnesio e calcio. Aggiungere 350 microlitri della soluzione madre diluita nella rispettiva camera e incubare per cinque minuti a temperatura ambiente. Sciacquare tutte le camere due volte utilizzando 350 microlitri di DPBS con magnesio e calcio per lavare via il collagene e l'acido acetico rimanenti.
Rimuovere le spine da un sito e spostarle sull'altro lato. Dopo aver lavato nuovamente la camera, aggiungere 350 microlitri di terreno di coltura delle cellule endoteliali. Rimuovere le spine da un sito e spostarle sull'altro lato.
Quindi aggiungere 350 microlitri di terreno di crescita delle cellule endoteliali in ciascuna camera. Prendiamo gli HUVEC coltivati nei passaggi da uno a tre con confluenza cellulare dall'80% al 90% nel terreno di crescita delle cellule endoteliali. Quindi rimuovere il terreno di coltura cellulare da un pallone di coltura cellulare T25 e lavare delicatamente le cellule con tre-cinque millilitri di DPBS senza magnesio e calcio.
Una volta rimossa la soluzione, aggiungere un millilitro di reagente di dissociazione della tripsina e incubare per cinque minuti a 37 gradi Celsius fino a quando le cellule non si staccano dal pallone. Trasferire le cellule staccate in una provetta utilizzando nove millilitri di FBS al 5% in PBS senza magnesio e calcio. Centrifugare a 350G per cinque minuti a temperatura ambiente.
Dopo aver spostato il surnatante, risospendere il pellet cellulare in un millilitro di terreno di crescita delle cellule endoteliali. Aggiungere il rispettivo volume di cellule alla camera e incubare i biochip in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. Eseguire una sostituzione del mezzo della camera contenente HUVEC con 350 microlitri di terreno di crescita delle cellule endoteliali dopo 24 ore.
Se compaiono bolle d'aria nei biochip microfluidici, chiudere tutte le porte del biochip oltre alle porte della camera interessata. Inclinare il truciolo per spostare la bolla d'aria vicino a un'estremità della cavità. Dalla porta dell'altra estremità, spingere 700 microlitri di terreno di coltura cellulare attraverso la camera tenendo i tappi opposti.
