Preparazione e raccolta di embrioni di Drosophila per la transgenesi

Per iniziare, bagnare un panno con una soluzione di macinazione. Fissare il panno sulla smerigliatrice ad ago, quindi collegare un ago a una pompa dell'aria a pedale utilizzando un tubo capillare in silicone. Montare l'ago sul portaago della smerigliatrice.

Regolare l'angolo dell'ago in modo che sia piegato di 35 gradi rispetto alla piastra di macinazione. Utilizzare la manopola di controllo grossolana sotto il microscopio per regolare la posizione della punta dell'ago fino a posizionarla appena sopra la superficie di macinazione. Quindi, utilizzare la pompa dell'aria a pedale per mantenere la pressione interna dell'ago a 40 libbre per pollice quadrato.

Quindi, utilizzare la manopola di controllo fine per fare in modo che la punta dell'ago tocchi la piastra di macinazione. Dopo aver macinato per tre-cinque secondi, scaricare l'ago quando le bolle d'aria iniziano a fuoriuscire dalla punta. Quindi, scaldare una pipetta da 200 microlitri con la fiamma esterna di un bruciatore ad alcool.

Quando la punta della pipetta inizia a sciogliersi, allungarla. Tagliare l'estremità sigillata del puntale della pipetta con le forbici. Per declorare gli embrioni di Drosophila, rimuovere le mosche dalle piastre di agar per succo d'uva con un pennello.

Sciacquare gli embrioni raccolti in un colino cellulare con acqua distillata doppia. Asciugare il colino cellulare con carta velina. Quindi, metti il colino essiccato in una capsula di Petri contenente il 30% di candeggina.

Mescolare manualmente il colino cellulare per garantire una miscelazione uniforme. Sciacquare gli embrioni in acqua distillata per due minuti prima di prelevare gli embrioni galleggianti con un pennello per creare una linea per un'ulteriore transgenesi.