Passaggio di cellule Caco-2 per valutare la citotossicità dei metaboliti dei pesticidi dal callo di carota trattato con pesticidi

Procedere al passaggio delle cellule dopo averle coltivate fino a raggiungere una densità cellulare superiore all'80%Dopo aver scartato il terreno di coltura, lavare le cellule tre volte con PBS. Quindi aggiungere un millilitro di soluzione di tripsina-EDTA al pallone e distribuirlo uniformemente per il contatto completo con la cellula. Una volta che le cellule passano da una forma aderente a piccole punte rotonde, come osservato al microscopio con un ingrandimento di 100X, rimuovere la soluzione digestiva.

Picchiettare delicatamente la parete del pallone per staccare le cellule. Aggiungere due millilitri di DMEM e ripetere il risciacquo della parete del pallone 10 volte. Picchiettare delicatamente la parete del pallone e trasferire un millilitro della sospensione cellulare in un altro pallone di vetro.

Aggiungere cinque millilitri di DMEM a ogni pallone di vetro. Picchiettare delicatamente la parete del pallone per distribuire uniformemente le cellule. Coltivare le cellule a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica fino a quando la densità cellulare non supera l'80%