Esposizione delle cellule Caco-2 ai metaboliti dei pesticidi dal callo di carota trattato con pesticidi per lo studio di citotossicità

Procedere con l'esecuzione del test di esposizione. Una volta raccolto un numero sufficiente di cellule, picchiettare delicatamente la parete del pallone contenente le cellule per distribuirle uniformemente e trasferire le sospensioni cellulari in una provetta da centrifuga da 15 millilitri. Diluire la sospensione cellulare con DMEM in combinazione con la citometria per ottenere la densità cellulare desiderata.

Picchiettare delicatamente la parete del pallone per garantire una distribuzione uniforme delle cellule. Quindi, aggiungere 100 microlitri di PBS ai pozzetti esterni della piastra a 96 pozzetti per evitare che il terreno di coltura evapori a causa dell'effetto bordo. Aggiungere 100 microlitri di sospensione cellulare ai pozzetti sinistri della piastra e lasciarla riposare per 10 minuti.

Incubare le cellule a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica per 48 ore. Dopo aver rimosso la piastra a 96 pozzetti dall'incubatore, scartare il terreno di coltura. Per impostare un gruppo di metaboliti dei pesticidi, aggiungere 100 microlitri delle diverse soluzioni preparate per l'esposizione ai residui di pesticidi a ciascun pozzetto designato.

Quindi aggiungere 100 microlitri delle diverse soluzioni di esposizione ai pesticidi madri preparate a ciascun pozzetto designato per il confronto per stabilire un gruppo genitore di pesticidi. Per impostare un controllo in bianco, aggiungere 100 microlitri di DMEM contenenti lo 0,3% di DMSO a ciascun pozzetto designato. Incubare le cellule a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica per 24 ore.