Dopo la decapitazione, sterilizzare il corpo del topo neonato anestetizzato con etanolo al 70%. Usando una pinza e forbici chirurgiche a punta sottile, praticare un'incisione tra l'addome e le zampe posteriori. Quindi rimuovere la pelle tirandola verso il piede degli arti posteriori.
Raschiare il tessuto connettivo e il muscolo attaccato alle ossa usando una pinza affilata. Taglia la tibia e il femore con le forbici. Usa una pinza per posizionare la tibia e il femore in un tubo di coltura MEM su ghiaccio.
Trasferire le ossa in un colino da 40 micron con una provetta di raccolta. Schiacciare le ossa con uno stantuffo da siringa da tre millilitri contro il colino per rilasciare il midollo. Centrifugare la sospensione cellulare a 350 G per cinque minuti a quattro gradi Celsius.
Aspirare il surnatante e risospendere delicatamente le cellule in cloruro di sodio allo 0,2% per ottenere una soluzione ipotonica per la lisi degli eritrociti. Aggiungere immediatamente un volume uguale di cloruro di sodio all'1,6% per rendere la soluzione isotonica. Centrifugare il surnatante e rimuovere la soluzione di lisi.
Risospendere le celle in DMEM completo e contare le cellule su un contatore di celle automatizzato.
