Rivitalizzare le colture di Sulfolobus acidocaldarius per la sperimentazione dell'evoluzione della temperatura

Per iniziare, usa un bruciatore bunsen per riscaldare accuratamente un filo di acciaio smussato. Foralo nel coperchio di una provetta da microcentrifuga da due millilitri per creare un foro largo un millimetro. Posizionare i tubi forati in un recipiente autoclavabile per la sterilizzazione.

Una volta che le provette sono state sterilizzate in autoclave e raffreddate, riempirle con 1,5 millilitri di BBM+Now utilizzare un puntale di pipetta per raschiare circa 50-60 milligrammi di coltura di Sulfolobus acidocaldarius da un brodo di glicerolo. Trasferire l'inoculo nelle provette riempite BBM+. Tenere una provetta non inoculata con BBM+ come controllo negativo.

Per evitare che gli aerosol fuoriescano dal coperchio del tubo forato, posizionare una membrana permeabile ai gas tollerante al calore sulla parte superiore del coperchio. Posizionare le provette inoculate in un termomiscelatore per l'inoculazione. Dopo che le colture hanno raggiunto la densità ottica richiesta, centrifugare le provette a 5.000 G per due minuti a temperatura ambiente.

Quindi, pipettare il surnatante per scartarlo. Aggiungere 1,5 millilitri di BBM+ caldo al pellet e risospendere il pellet di cella nel terreno. La crescita è risultata simile quando si confronta l'incubazione con termomiscelatori con quella negli incubatori convenzionali.