Inizio di lignaggi indipendenti di colture di Sulfolobus acidocaldarius per la sperimentazione dell'evoluzione della temperatura

Per iniziare, utilizzare uno spettrofotometro per misurare la densità ottica di una coltura iniziale di sulfolobus acidocaldarius. Successivamente, crea diluizioni seriali della coltura di partenza da 10 a 1 a 10 a 6. Pipettare 100 microlitri ciascuno dalle diluizioni 10 a 5 e da 10 a 6, quindi trasferirli nei pozzetti di una piastra a sei pozzetti contenente BBM plus solido.

Metti la piastra in una scatola con un panno umido in un'incubatrice statica a 75 gradi Celsius per cinque o sette giorni fino a quando non emergono singole colonie. Per stabilire il numero desiderato di lignaggi in evoluzione da singole colonie, con un ciclo di inoculazione, scegli una colonia a caso. Risospendere la colonia in 1,5 millilitri di BBM plus preriscaldato contenuto in un tubo forato da due millilitri.

Etichettare il tubo in modo appropriato. Dopo aver ripetuto la risospensione per diverse colonie, riempire un tubo con 1,5 millilitri di terreno come controllo negativo. Sigillare la parte superiore delle provette con una membrana traspirante, quindi incubarle in un termomiscelatore fino a quando le colture non diventano torbide.

Centrifugare le colture clonali a 5.000 G per un minuto a temperatura ambiente. Dopo aver scartato il surnatante, pipettare 200 microlitri di BBM plus nella provetta e risospendere il pellet. Aggiungere 200 microlitri di glicerolo al 50% in ogni tubo per creare gambi di glicerolo.

Quindi, conservare i gambi a 80 gradi Celsius fino a ulteriori esperimenti.