Sperimentazione sull'evoluzione della temperatura con Sulfolobus acidocldarius

Per iniziare, usa le popolazioni ancestrali di Sulfolobus acidocaldarius rianimate. Aggiungere BBM plus per diluire le colture a un OD600 di 0,01. Pipettare il volume appropriato di ciascuna delle sette colture in tre provette separate forate da due millilitri.

Sigillare i tubi con una membrana traspirante, quindi posizionare ogni serie di sette popolazioni ancestrali in termomiscelatori separati. Impostare ciascun termomiscelatore alla temperatura richiesta e a 400 giri/min per iniziare l'esperimento di evoluzione. Dopo 48 ore, trasferire 15 microlitri di ciascuna delle colture di trasferimento zero in 1,5 millilitri di BBM più terreno riscaldato contenuto in una provetta forata da due millilitri etichettata come transfer.

Sigillare le provette con una membrana permeabile prima di riposizionarle in posizioni casuali nei rispettivi termomiscelatori. Misurare l'OD600 dello zero di trasferimento in uno spettrofotometro a piastra per completare il primo trasferimento. Ripetere il trasferimento della coltura e la misurazione della densità ottica ogni due giorni per eseguire i trasferimenti fino a raggiungere il numero di trasferimenti desiderato.

Preparare le scorte di glicerolo delle popolazioni dopo ogni 10 trasferimenti e durante il trasferimento finale ed etichettare la provetta con l'identificatore della popolazione ancestrale e il numero di trasferimento. I termomiscelatori devono essere impostati a temperature costanti di 75 gradi Celsius e 65 gradi Celsius. Un terzo termomiscelatore verrà gradualmente diminuito per osservare la risposta al cambiamento graduale.