Saggi di crescita post-evoluzione di Sulfolobus acidocaldarius Lignaggi ancestrali ed evoluti

Per iniziare, incubare le colture ancestrali e evolute in temperatura di Sulfolobus acidocaldarius alle temperature finali. Una volta completata l'incubazione, misurare le loro densità ottiche a 600 nanometri. Quindi, aggiungere 1,5 millilitri di BBM plus in sei serie da sette provette per ogni coltura.

Quindi aggiungere 15 microlitri di ciascuna coltura nei sei set di provette. Impostare tre termomiscelatori a 75 gradi Celsius e tre termomixer a 65 gradi Celsius. Posizionare le provette nel termomiscelatore corrispondente alla temperatura e replicare ID.Dopo un trasferimento di incubazione di 48 ore, 200 microlitri da ciascuna coltura in una piastra a 96 pozzetti.

Misurare la densità ottica con uno spettrofotometro. Infine, tracciare e analizzare i dati con un software statistico. I lignaggi dalla condizione costante di 75 gradi Celsius sono aumentati in OD600 da un intervallo iniziale entro la fine dell'esperimento.

Al contrario, i lignaggi del trattamento costante a 65 gradi Celsius hanno mostrato un calo. Le popolazioni nel trattamento con caduta di temperatura sono aumentate dalla densità ottica iniziale al trasferimento sei, quindi hanno mostrato un calo costante.