Per iniziare, recupera dall'incubatore la piastra contenente inserti di coltura cellulare con monostrati 2D derivati da organoidi. Rimuovere i terreni di coltura monostrato dalle camere apicali e basolaterali degli inserti di coltura cellulare da valutare. Lavare delicatamente le camere apicale e basale due volte con 200 e 500 microlitri di PBS preriscaldato.
Rimuovere la soluzione di lavaggio dalla camera apicale e applicare 200 microlitri di tracciante FITC-destrano da 0,5 millilitri per millilitro in PBS nella camera apicale dell'inserto di coltura cellulare. Incubare la piastra in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius e al 5% di anidride carbonica per 20 minuti. Quindi campionare 50 microlitri dalla camera basolaterale della piastra incubata a 24 pozzetti e trasferirli in una piastra a 96 pozzetti compatibile con un lettore di micropiastre.
Sostituire 50 microlitri di PBS fresco nella camera basolaterale del pozzetto campionato. Utilizzando un lettore di micropiastre precalibrato, misurare immediatamente l'intensità della fluorescenza a una lunghezza d'onda di eccitazione di 495 nanometri e una lunghezza d'onda di emissione di 535 nanometri.
