Per iniziare, ottenere cellule mononucleate umane dal sangue intero. Vorticare il reagente bloccante FcR umano e aggiungere la quantità richiesta di reagente alle cellule. Incubare la provetta con cellule a quattro gradi Celsius per cinque minuti.
Aggiungere 20 microlitri di microsfere CD11b per 10 alla potenza di sette cellule totali e incubare a quattro gradi Celsius per 20 minuti. Disinfettare accuratamente il supporto magnetico con etanolo al 70%. Dopo l'incubazione, aggiungere 10 millilitri di tampone di isolamento.
Mescolare e centrifugare la provetta a 300 G per 10 minuti a quattro gradi Celsius. Una volta che il supporto si è asciugato, posizionare la colonna magnetica sul supporto magnetico. Dopo aver rimosso il surnatante, aggiungere un millilitro di tampone isolante e mescolare delicatamente con la pipetta.
Quindi caricare la sospensione della cella sulla colonna e lavarla tre volte con tre millilitri di tampone isolante ogni volta che il serbatoio della colonna è vuoto. Posizionare la colonna in un tubo conico da 15 millilitri senza toccare la parte magnetica. Dopo aver aggiunto cinque millilitri di tampone di isolamento, spingere lo stantuffo nella provetta per forzare l'uscita del liquido attraverso la colonna.
Centrifugare la sospensione cellulare raccolta nella provetta. Aspirare il surnatante e risospendere le cellule in terreno di isolamento. Dopo il conteggio delle cellule, aliquotare 500 microlitri di sospensione cellulare in ciascun pozzetto di una piastra a 24 pozzetti e incubare durante la notte.
Per indurre cellule simili alla microglia, sostituire il terreno di isolamento della semina del giorno precedente con un mezzo di induzione e incubare le cellule per 14 giorni. Le cellule simili alle microglia indotte mostravano minuscoli corpi soma e numerosi collaterali ramificati.
