Per iniziare, utilizzare un estrattore per pipette per allungare un capillare di vetro largo 20 micrometri. Metti un utero di topo estratto su un tovagliolo di carta asciutto. Quindi, inserisci la punta di un paio di forbici sottili nel lato miometriale dell'utero, fai scorrere lentamente il bordo della lama per tutta la lunghezza e tagliala.
Ora, esporre e tagliare i decidui. Trasferitele in un piatto con terreno di coltura. Sezionare i decidui per estrarre gli embrioni.
Trasferisci gli embrioni in una capsula di Petri da 60 millimetri contenente un terreno di coltura caldo. Con un paio di pinze sottili, taglia con cura la coda e la testa dell'embrione e lascia solo il tronco del corpo. Rimuovere con cura quanto più tessuto possibile dal tronco senza danneggiare il cuore o le arterie polmonari e aorta.
Inserire un nuovo ago allungato nella punta della pipetta orale, aspirare con cura e caricare 10 microlitri di una miscela plasmidica preparata nell'ago allungato. Metti un singolo cuore in una capsula di Petri pulita da 60 millimetri contenente PBS preriscaldato. Posizionare il piatto sotto un microscopio da dissezione.
Regolare la distanza tra i poli degli elettrodi positivo e negativo a circa quattro millimetri. Quindi, utilizzare un ago nella pipetta orale per perforare delicatamente lo strato più superficiale del cuore. Trasferire uno o due microlitri della miscela plasmidica nel cuore.
Rimuovere l'ago con cautela. Tenere l'elettrodo in posizione in modo che il cuore si trovi tra entrambi i poli. Quindi, elettropora il cuore.
Trasferire il cuore elettroporoso in una nuova piastra a 12 pozzetti, contenente un millilitro di terreno di coltura. Incubare la piastra a 37 gradi Celsius sotto il 5% di anidride carbonica fino all'analisi.
