Per iniziare, in una cappa laminare, erogare sei millilitri di terreno di Soutan integrato con il 2% di glucosio nei pozzetti di una piastra a sei pozzetti. Inoculare i pozzetti con 120 microlitri di colture secondarie di mycobacterium smegmatis. Tenerne uno non inoculato bene come un controllo dei media.
Quindi, pipettare la coltura su e giù con una micropipetta da 1 millilitro per una miscelazione uniforme. Coprire il coperchio e sigillare accuratamente il piatto con pellicola di paraffina. Incubare la piastra in un'incubatrice statica a 37 gradi Celsius per sette giorni.
Per una stima visiva della crescita del biofilm, posizionare le piastre in un sistema di documentazione su gel sotto illuminazione a luce bianca epi. Per misurare il peso a secco, pesare un foglio di carta assorbente. Estrarre il biofilm dalla piastra a sei pozzetti e trasferirlo sulla carta con una spatola.
Raccogli con cura la maggior parte del biofilm dalla coltura. Posizionare il biofilm sulla carta assorbente. Metti la carta assorbente in un'incubatrice fino a quando il biofilm non si asciuga completamente.
Quindi misurare il peso combinato della carta e del biofilm. Le pellicole di biofilm sono state visibili dal giorno 3 in poi. La reticolazione delle colture è migliorata con l'aggiunta del 2% di glucosio ai terreni di Soutan.
Lo sviluppo del biofilm è stato visibile tra il giorno 3 e il giorno 6. Un film con una leggera reticolazione è stato osservato il giorno 3. Questo film è maturato dal quinto giorno e si è disintegrato dal sesto giorno.
