Dopo aver arricchito il campione polmonare per le cellule T, aggiungere un millilitro di dasatinib da 10 millimolari a ciascun campione. Agitare la miscela e incubare per cinque minuti a temperatura ambiente. Aggiungere il peptide coniugato PE o APC MHC tetramero a una concentrazione finale di 10 nanomolari.
Dopo aver agitato la miscela, incubarla al buio per un'ora a temperatura ambiente. Mentre il campione è colorato con tetrameri peptidici MHC, preparare una miscela master di anticorpi per colorare i marcatori della superficie cellulare con 15 minuti rimanenti nel periodo di incubazione della colorazione del tetramero, aggiungere la miscela master di anticorpi di superficie a una diluizione da 1 a 100. Aggiungere 50.000 microsfere di conteggio per citometria a flusso e tampone selezionatore a freddo per raggiungere un volume finale di circa cinque millilitri, quindi aggiungere il tampone selezionatore a freddo a un volume di 15 millilitri e centrifugare la provetta a 400 x g per cinque minuti a quattro gradi Celsius.
Aspirare con cura il surnatante, lasciando circa 100 microlitri di surnatante e il pellet cellulare. Ora risospendere il campione con altri 200 microlitri di tampone di selezione e trasferirlo in una provetta FACS da cinque millilitri.
