Per iniziare, ottieni embrioni da un topo femmina appena accoppiato. Preparare 12 microgocce di Potassium Simplex Optimized Medium sul fondo di una piastra di Petri da 35 millimetri. Coprire le microgoccioline con tre-cinque millilitri di olio minerale e posizionare le piastre di Petri in un'incubatrice a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica per l'equilibrio.
Utilizzando una pipetta di trasferimento, trasferire gli embrioni di topo dal terreno M2 al terreno KSOM. Metti gli embrioni lavati nelle microgoccioline KSOM preparate e incubali a 37 gradi Celsius con il 5% di anidride carbonica per quattro giorni. Selezionare le blastocisti vantaggiose in base alle dimensioni, alla massa cellulare interna, al numero di cellule del trofoblasto e al grado di espansione.
Aggiungere un millilitro di gelatina al 2% in una piastra di coltura a 12 pozzetti e incubare a 37 gradi Celsius per 30 minuti. Quindi aspirare la gelatina in eccesso e lasciare asciugare completamente il fondo del piatto. Seminare cellule di adenocarcinoma endometriale umano o cellule di Ishikawa nella piastra a 12 pozzetti rivestita di gelatina e incubare la piastra per 24 ore.
Posizionare delicatamente da cinque a 15 blastocisti fresche in ciascun pozzetto della piastra a 12 pozzetti contenente le cellule. Dopo 48 ore, osservare gli embrioni al microscopio per valutare il loro stato di attaccamento dopo aver spostato la piastra tre volte. Gli embrioni non attaccati galleggeranno o rotoleranno sulla superficie delle cellule.
Infine, calcola il tasso di impianto dell'embrione in presenza di varie concentrazioni di estrogeni. I risultati hanno dimostrato che concentrazioni quasi fisiologiche di 17 beta-estradiolo hanno aumentato i tassi di impianto dell'embrione rispetto al controllo senza 17 beta-estradiolo. Tuttavia, concentrazioni elevatissime di 17 beta-estradiolo intorno a 100 nanomolari hanno ridotto significativamente i tassi di impianto dell'embrione.
